Состав ДНК-реципиента
Для анализа сотрудники W.Haseltine использовали для инфицирования клеток вирионы ВИЧ, меченые радиоизотопами по белкам. Выделенные частицы «80 S» подвергли электрофорезу после обработки додецилсульфатом натрия. Этим методом обнаружили в составе комплекса один единственный белок с молекулярным весом 31 kD – р31. Это собственно фермент интеграза -один из четырех продуктов гена pol. Этот результат подтверждается теми данными, что специфические антисыворотки, полученные против очищенной интегразы, преципитируют структуру «80S». Антисыворотки против обратной транскриптазы Или против р24 не преципитируют прединтеграционный комплекс «80S». Отсюда можно заключить, что если и есть еще какие-либо компоненты кроме ДНК и интегразы в составе комплекса «80S», то они присутствуют в количествах, неуловимых вышеназванными методами и, следовательно, если и существуют, то могут составлять не более 10% от общей массы вещества «80S». Не исключено, что дополнительные компоненты могут быть не собственно вирусными, а клеточными белками. Во всяком случае, из опыта следует, что если ДНК провируса и интегразу отделить друг от друга (очистить), а потом смешать вновь, то смесь хотя и способна интегрироваться в ДНК-реципиент, но менее эффективно, чем нативный комплекс «80S». С момента интеграции начинается стадия латентной инфекции. Латентной называется такая форма инфекции, когда вирус присутствует в клетке единственно в виде интегрированной в геном ДНК провируса. При этом нет процессов транскрипции и трансляции с вирусных генов, а следовательно, и экспрессии вирусных белков. Следовательно, вирус «не раздражает» своими антигенами иммунную систему организма и, следовательно, нет иммунного ответа на вирус в виде специфических антител и сенсибилизированных лимфоцитов. Такую форму инфекции, а именно ДНК провируса, можно обнаружить в геномах клеток такими методами как цепная полимеразная реакция, гибридизация нуклеиновых кислот со специфическими зондами in situ или Southern/Northern blot.
Понятие латентной инфекции в вышеописанном смысле относится к отдельной клетке. Продолжительность латентной стадии инфекции, очевидно, сильно колеблется в разных клетках, выход в продуктивную стадию инфекции не синхронизирован, так как велик репертуар клеток-мишеней для ВИЧ. Приблизительные цифры соотношения численности клеток, несущих латентную или продуктивную формы инфекции ВИЧ, для мононуклеарных клеток периферической крови, например, таковы: ДНК провируса определяется методом ЦПР в 1% клеток, тогда как экспрессия белков вируса регистрируется методом иммунофлюоресценции в 0.01-0.001% клеток этого типа [Green W.C., 1990].
Тем не менее, на уровне организма могут действовать общие для многих типов клеток факторы, способные активировать латентный геном провируса к экспрессии. Опыт показывает, что такими ко-факторами могут быть сопутствующие другие вирусные и бактериальные инфекции, повышенный уровень глюкокортикоидных гормонов, гипертермия, ультрафиолетовое излучение с длинами волн 200-290 нм и, возможно, многое, о чем мы еще не знаем. Для организма в целом период скрытой инфекции называется термином «инкубационный», а не латентный. К уровню целого организма мы обратимся в разделе о патогенезе СПИД. Пока вернемся на уровень отдельной клетки.