Использование коротких синтетических пептидов

Одно из возможных преимуществ пептидов перед белком в плане применения in vivo, например, то, что пептид существенно лучше, чем белок проникает из крови в ткани лимфатических узлов, кожи, мозга и т.д. Мы уже упоминали работу Lifson J.D., et al. [1988] по синтетическим пептидам из последовательности CD4. Результаты их своеобразны и имеют интерес для работ с синтетическими пептидами вообще. Авторы синтезировали твердофазным синтезом 7 пептидов длиной по 25-30 аминокислот. Исследовали способность этих пептидов блокировать индуцированное ВИЧ синцитиообразование в совместной культуре клеток Н9, инфицированных ВИЧ-1 НХВ2, и индикаторных клеток линии VB или CEM-SS. Исследовали биологическую активность как очищенных высокоэффективной жидкостной хроматографией (HPLC) препаратов пептидов, так и неочищенных после синтеза препаратов, содержащих примеси дериватов пептидов. Шесть из полученных пептидов не блокировали и не усиливали вирус-индуцированное синцитиообразование. Это пептиды с последовательностями аминокислот NN 1-25, 26-50, 51-75, 95-118, 331-355.
Только неочищенный препарат одного из пептидов с последовательностью аминокислот NN 76-94 блокировал синцитиообразование в тест-культуре. При этом он не блокировал пролиферацию в смешанной культуре лимфоцитов, то есть не препятствовал нормальному взаимодействию CD4 на Т-лимфоцитах с антигенами II класса ГКГС на антиген-представляющих клетках, Эффект блокировки вирус-индуцированного синцитиообразования достигался при концентрации пептида вместе с примесями дериватов 125 микромолей. После фракционирования препарата методом HPLC, фракция чистого пептида оказалась биологически неактивной. При этом удельная активность фракции дериватов возросла примерно вчетверо: эффект блокировки синцитиообразования достигался при концентрации менее 32 микромолей. Последовательность аминокислот в пептиде NN 76-94 такова: LKIEDSDTYICEVEDQEEE. Примененная в работе методика синтеза сопровождается образованием в реакционной смеси S-бензил производных пептида с заданной последовательностью аминокислот. Чтобы проверить догадку, не проявляют ли биологическую активность именно S-бензил дериваты пептида NN 76-94, авторы выполнили бензилирование очищенного пептида по остатку цистеина в позиции N 86, так как в неочищенном препарате анализ выявил S-бензил