Встраивание нуклеотида в CD4

В работе Mizucami Т. et al. [1988] выполняли направленный мутагенез другого типа. В определенные позиции гена внеклеточной части CD4 встраивали нуклеотид TCGCGA, кодирующий пару аминокислот серин-аргинин. Таким образом, мутированные гены sCD4 встраивали в вектор экспрессии -вирус осповакцины, которым инфицировали клетки почки обезьяны CV-1. Эти клетки, в свою очередь, секретировали в среду растворимые мутантные формы CD4. Методом радиоиммуноанализа оценивали их прямое связывание с gp120, меченным 35-8-метионином. Из таких опытов сделали заключение, что в непосредственном связывании с вирусным gp120 задействован участок молекулы CD4 с номерами аминокислот NN 31-57.
Кроме участка непосредственного связывания с gp120, в молекуле белка CD4 есть участки, модификация которых дистантно влияет на реакционную способность самого сайта связывания, вплоть до полного исчезновения этой реакционной способности. Об этом свидетельствует, например, тот факт, что блокировать связывание CD4 с gp120 могут не только анти-СD4 антитела, конкурирующие с gp120 за сам сайт связывания, но и некоторые, направленные к другим участкам молекулы CD4.
В литературе описан ряд моноклональных анти-СD4 антител, способных блокировать полностью или частично инфекцию ВИЧ в СD4-позитивные клетки-мишени в культуре in vitro.
Про антитела ОКТ4Д и ОКТ4Е известно, что они блокируют связывание gp120 с CD4 лишь частично.
Жизненно-важной характеристикой состава и строения молекулы CD4, и в том числе участка связывания с gp120 ВИЧ (в отличие от самого ВИЧ) является высокий генетический консерватизм. Отсюда следует как минимум два вывода:

• 1. Практически нет надежды, что в силу природного генетического полиморфизма рецепторной молекулы CD4 выявятся субпопуляции людей, невосприимчивых к инфекции ВИЧ.
• 2. Если сильно изменчивый вирус специфически реагирует с малоизменчивым рецептором на клетках, то изменчивость тех именно участков молекулы вирусного белка gp120, которые взаимодействуют с CD4, должна быть адекватна и сравнима с изменчивостью CD4, следовательно, невелика.

То есть, акцепторный участок вирусного белка gp120 должен быть высоко консервативен у всех изолятов ВИЧ, которые используют СD4-рецептор. Опыт подтверждает, что так оно и есть. Ниже мы приведем экспериментальные доказательства из экспериментов по структуре акцепторного участка молекулы gp120.