Дендритные клетки

Теперь мы остановимся подробнее на том, что известно о биологии данной вирусной инфекции в тех или иных конкретных типах клеток. Начнем с дендритных лимфоцитов, хотя роль их в естественном патогенезе данной инфекции стала проясняться только в работах 1990-91гг. Тот факт, что в лимфоцитах крови, имеющих морфологию дендритных, определяется методом гибридизации нуклеиновых кислот in situ РНК ВИЧ-1, установила Стелла Кнайт (S.Knight) с сотрудниками. Однако эти авторы работали с препаратами, обогащенными по дендритным лимфоцитам не более, чем до 30%. Более серьезно исследование дендритных лимфоцитов удалось продвинуть сотрудникам W. Haseltine – E.Langhoff и E.Tervilliger [Haseltine W., 1990], которые сумели очистить дендритные лимфоциты до 80% их содержания в препарате. Они выделяли дендритные клетки из фракции лейкоцитов из пуповинной крови. Сначала центрифугированием в фиколл-гепаке получили фракцию мононуклеарных клеток. Затем из них центрифугированием в градиенте плотности перколла выделили фракцию клеток с высокой плавучей плотностью. Из них методом Е-розеткообразования убрали основную массу Т-лимфоцитов. Оставшиеся клетки культивировали в течение 48 часов, после чего еще раз центрифугировали в градиенте плотности перколла. На этом этапе, в отличие от первого центрифугирования на перколле, выделили фракцию с низкой плавучей плотностью. Из нее удалили моноциты методом сорбции через Fc-рецептор на чашках, покрытых иммуноглобулином G человека. В оставшейся субфракции 50-60% клеток имели морфологические признаки дендритных лимфоцитов. Для дальнейшей очистки применили опять удаление других клеток сорбцией на чашке, предварительно покрытой специфическими моноклональными антителами (паннинг-метод от английского panning) против клеточных антигенов CD45/CD11B (В-лимфоциты), CD22 (моноциты) и CD5 (Т-лимфоциты). В итоге удалили остаточные В-лимфоциты, моноциты и Т-лимфоциты и получили препарат клеток, содержащий не менее 80% дендритных лимфоцитов. В исходной крови содержание дендритных лимфоцитов составляет не более 1% от числа ядросодержащих клеток крови.
Под микроскопом дендритные клетки по размеру больше, чем Т- и В-лимфоциты, и больше даже макрофагов. Они имеют большое неправильной формы ядро. Наиболее характерный их морфологический признак, которому они обязаны своим названием – наличие отростков, представляющих из себя тонкие выросты цитоплазмы. Число отростков – порядка 10-20. Известно, что в организме дендритные клетки, а также клетки Лангерганса, которые считают незрелой формой дендритных лимфоцитов, локализуются в коже, в слизистых оболочках, циркулируют в крови, где составляют примерно 1% от числа ядросодержащих клеток, имеются в паракортикальных зонах лимфатических узлов в тесном контакте с Т-лимфоцитами. В работах 1988-89 гг. экспериментально доказали, что дендритные клетки выполняют функцию представления чужеродных антигенов Т-лимфоцитам и способны обеспечивать клональную пролиферацию Т-лимфоцитов, причем в количественных экспериментах показали, что и то, и другое дендритные клетки делают в 100 раз эффективнее, чем макрофаги. Полагают, что физиологическая функция дендритных клеток состоит в том, чтобы первыми встретить чужеродный антиген на слизистых, в коже или в крови, после чего мигрировать в лимфоидные органы и представить антиген Т-лимфоцитам. Как раз это представление явилось побудительным мотивом для исследования роли дендритных клеток при инфекции ВИЧ, с тем, чтобы может быть понять механизмы заражения при нормальном сексуальном контакте и при попадании инфицированной крови или другого материала на другие слизистые оболочки (глаз, рта и т.д.) и не слишком сильно ороговевшую кожу.