Выделение вируса-возбудителя – ВИЧ

В истории открытия возбудителя СПИД – вируса HIV (Human Immune Deficiency Virus) или в русской аббревиатуре ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) имел место непродолжительный спор о приоритете между Робертом Галло (R.C.Gallo), руководителем лаборатории клеточной биологии опухолей в Национальном Институте рака в США, и Люком Монтанье (L.Montagnier), профессором вирусологии из Института Пастера во Франции. В октябре 1988г. в журнале «Scientific American» [V.259, N 4] появилась первая совместная статья этих авторов под названием «СПИД в 1988». По их общему признанию идея о том, что этиологическим инфекционным агентом СПИД вероятно является ретровирус, принадлежит R.C.Gallo. Это предположение и подтвердилось. Первое экспериментальное наблюдение вируса при электронно-микроскопическом исследовании препаратов из лимфоузла больного было сделано в лаборатории L.Montagnier [Barre-Sinousii F., et al., 1983]. R.C.Gallo занимался ретровирусами с 1970г. Вскоре после открытия H.Temin фермента обратной транскрипции – обратной транскриптазы, R.C.Gallo с сотрудниками обнаружили активность такого фермента в клетках лейкемии человека. В неопухолевых активно пролиферирующих гемопоэтических клетках подобной активности не было. Эти работы были выполнены в 1970г. [Gallo R. et al., 1970], и с этого времени R.C.Gallo начал поиск ретровирусов человека. Ассоциированную с опухолевыми клетками обратную транскриптазу стали использовать как диагностическую пробу на наличие предполагаемых ретровирусов, но прямое выделение биологически активных ретровирусов не удавалось, пока не были разработаны методы долгосрочного культивирования in vitro лимфоцитов человека. Такое культивирование стало получаться только после открытия факторов роста лимфоцитов, в первую очередь интерлейкина-2. Этот методический аппарат был также разработан в лаборатории R.C.Gallo [Morgan D.A. et al., 1976]. В результате продолжительных и трудоемких работ в 1980г. R.C.Gallo выделил первый ретровирус человека. Его назвали HTLV (от Human T-Cell Leukemia Virus). Вскоре он получил номер 1 -HTLV-1. Этот ретровирус поражает Т-лимфоциты человека и вызывает их злокачественную трансформацию, приводящую к развитию агрессивного Т-клеточного лейкоза [Poiesz B.J. et al., 1986]. В 1982r. R.C.Gallo выделил второй ретровирус человека, названный HTLV-2. Этот ретровирус также поражает Т-лимфоциты и вызывает развитие хронического волосистоклеточного Т-лейкоза [Gallo R., Montagnier L., 1988].
Поэтому после того, как стало известно, что у заболевших СПИД резко истощается популяция Т-лимфоцитов и, кроме того, эпидемиологические параметры нового заболевания СПИД (заражение через кровь, половые контакты и трансплацентарно) таковые же, как у Т-лейкозов, вызываемых вирусами HTLV-1 и 2 в эндемичных районах, R.C.Gallo высказал вслух идею о том, что возбудителя СПИД стоит искать среди ретровирусов. Его группа начала работы по выделению предполагаемого возбудителя СПИД. Один из сотрудников L.Montagnier, J.Leibovich, командированный в лабораторию , R.C.Gallo, передал идею R.C.Gallo своим коллегам во Франции. К тому времени в Институте Пастера была создана специальная междисциплинарная группа по изучению СПИД под руководством L.Montagnier. Они решили проверить гипотезу R.C.Gallo. В январе 1983г. в лаборатории L.Montagnier был выделен ретровирус из клеток лимфатического узла от гомосексуалиста с синдромом лимфаденопатии, который уже принято было считать характерным ранним проявлением СПИД. Новый вирус назвали LAV (Lymphadenopathy – associated Virus). Будучи профессиональными вирусологами и электронно-микроскопистами, эти авторы в первом же наблюдении препаратов из лимфоузла больного обратили внимание на морфологическое сходство искомых вирусных частиц с известным им вирусом инфекционной анемии лошадей, который относится к семейству ретровирусов, подсемейству лентивирусов. Это сходство по форме побудило авторов искать сходства по функциональным свойствам, а именно, исследовать прямое цитопатогенное действие вируса на клетки хозяина, синцитиообразование, вовлеченность в патогенез клеток иммунной системы. Поэтому в процессе этой первой работы по выделению LAV установили, что этот вирус размножается в Т-лимфоцитах, несущих на мембране антиген CD4, но не в Т-лимфоцитах, несущих антиген CD8, и что вирус угнетает пролиферацию зараженных клеток или убивает их. С помощью специфических антител против ретровирусов HTLV-1 и HTLV-2, которые предоставил R.C. Gallo, в Институте Пастера показали, что LAV не реагирует с антителами против этих известных вирусов. Появилась первая публикация о выделении нового вируса, ассоциированного со СПИД [Barre-Sinoussi F. et al., 1983]. Для более подробных исследований французским ученым не удавалось наработать больших количеств искомого вируса.
К концу 1983г. в лаборатории R.C.Gallo вывели несколько линий перевивных Т-клеток, способных поддерживать размножение ретровирусов в препаративных количествах. Сотрудники лаборатории выделили ретровирусы от 48 больных СПИД, получили специфические антитела против одного из изолятов и с их помощью показали, что у всех этих больных выделяется иммунологически тождественные вирусы. Вирус назвали HTLV-III. Вскоре было показано, что HTLV-III и LAV это один и тот же вирус. R.C. Gallo и L. Montagnier -первооткрыватели вируса СПИД – согласились с Международной Комиссией при ICTV (International Committee for Taxonomy of Viruses) в том, чтобы в дальнейшем называть новый вирус единым термином – HIV (Human Immunodeficiency Virus). На русском языке он звучит как ВИЧ – вирус иммунодефицита человека.
В настоящее время мало у кого вызывает сомнение то, что ВИЧ является этиологическим агентом нового заболевания – СПИД. Однако изредка в печати появляются скептические заметки о том, что ВИЧ и СПИД не строго удовлетворяют классическим критериям Коха для признания инфекционного агента в качестве возбудителя конкретного заболевания [Duesberg Р., 1989].
Критерии (постулаты) Henle-Koch таковы:
1. Микроорганизм-возбудитель присутствует в организме пациента в каждом случае рассматриваемого заболевания.
2. Этот микроорганизм не удается выделить при других заболеваниях как случайный и непатогенный микроб.
3. После выделения из организма в культуру in vitro в чистом виде, микроорганизм способен вызвать развитие того же заболевания у других людей [Evans A.S., 1989].
Возражения P.H.Duesberg, однако, экспериментально еще менее доказуемо, чем содержащиеся в них вопросы, так как хотя бы два таких уже известных свойства ВИЧ, как наличие латентной формы инфекции с неопределенно долгим периодом времени до начала продуктивной инфекции и необычно высокая изменчивость вируса, не позволяют уверенно утверждать о наличии или отсутствии инфекции ВИЧ в тех случаях, когда стадия инфекции и доза вируса или антител к нему попадают за пределы чувствительности существующих методов диагностики. В связи с вирусоносительством без клинической манифестации можно сказать следующее: хотелось бы надеяться, что это явление обясняется существованием природных механизмов генетической резистентности у отдельных лиц, но доказательств этого пока нет. Известны случаи, когда клиническая манифестация состоялась через 5 – 10 лет после документально зарегитрированного контакта с инфекционным материалом [Moss A.R., et al, 1988]. Поэтому, если в каком-то конкретном случае бессимптомное вирусоносительство продолжается 10 лет, то никто не может сказать, что на 11-й год не разовьется СПИД.
По итогам наблюдений, сделанных за десять лет после открытия ВИЧ, период времени между заражением и проявлением клинических симптомов очень сильно варьирует у разных людей. В данном случае речь не идет о симптоматике острого вирусного синдрома, который почти не поддается дифференциальной диагностике и не различим при инфекциях вирусами гриппа и ВИЧ, а также многими другими патогенными вирусами. Медианное значение периода времени между зарегистрированной сероконверсией (то есть определением в крови антител, специфических к ВИЧ, как симптома наличия данной инфекции в организме) и развитием клинических симптомокомплексов, характерных для СПИД, определено по обобщенным данным десяти специальных исследований на контролируемых группах пациентов [Polis М., Masur Н., 1990] как 7-11 лет. При этом только у 5% лиц СПИД развивается в первые три года после инфицирования. В последующие 8 лет СПИД развивается со скоростью 3-7% инфицированных лиц в год. Отсюда видно насколько сильно латентная часть этого «айсберга» превосходит видимую, доступную регистрации часть. Экстраполяция данных первого десятилетия с помощью методов математического моделирования дает следующие предсказания: среди лиц, инфицированных вирусом СПИД, клиническая манифестация наступит у 65-100% в течение 16 лет от момента заражения [Lemp G. et al., 1990].
Известно уже достаточно много подробностей патогенеза СПИД откуда следует, что есть множество факторов, которые являются пермиссивными по отношению к вирусу ВИЧ. Их называют ко-факторами в развитии СПИД. Они будут подробно рассмотрены в разделе о патогенезе заболевания.
В одних только США за первую половину 1991г. вновь инфицировано от 40 до 80 тысяч людей. В странах суб-сахарной Африки к началу 1991г. считается инфицированными один из каждых 35 человек в возрастной группе от 15 до 49 лет, причем равно как мужчины, так и женщины. Кроме медицинских проблем перед африканцами встают связанные со СПИД экономические проблемы. Специалисты ВОЗ рассчитали, что в ближайшие 10 лет Африке угрожает голод по причине потери рабочей силы от СПИД.
В страны Азии ВИЧ пришел позже чем в Африку, Америку, Австралию и Европу. Еще в конце 80-х годов официальные представители медицинских служб ряда стран Азии говорили, что СПИД – это Западная проблема, что население Азии генетически резистентно к ВИЧ или что региональные азиатские штаммы ВИЧ непатогенны. Увы. В начале 90-х годов маятник качнулся в противоположную сторону: ожидается, что к середине декады 90-х число вновь инфицированных людей в Азии превзойдет число инфицированных людей во всех индустриально развитых странах. СПИД есть и в Японии, и в Китае. В Индии в октябре 1989г. была выявлена только одна проба крови с антителами к ВИЧ. Всего через восемь месяцев из 1500 проб крови, протестированных в Манипуре, 54% показали положительную реакцию на антитела к ВИЧ. Индийские специалисты считают, что к 2000 году в одной только Индии может быть 10 млн. инфицированных. В Таиланде уже сейчас 30% обследованных проституток серопозитивны.
В нашей стране к началу 1991г. было проведено 90 млн. анализов на антитела к ВИЧ, считая повторные обследования первично серопозитивных. Положительную реакцию показали 550 человек. Но сотрудники любой иммунодиагностической лаборатории узнают первыми, что практически каждую неделю выявляются новые положительные по антителам к ВИЧ пробы крови. Сколько же среди нас на самом деле инфицированных? Точно не скажет никто. К сожалению, сбор и анализ информации неудовлетворительны не только в нашей стране, но даже на уровне ВОЗ. James Chin, которого называют «мистером Статистиком» Всемирной Организации Здравоохранения, отметил на VII Международной конференции по СПИД, что информация в ВОЗ даже из развитых стран поступает с задержкой на год и более, четкость и корректность представления данных оставляет желать лучшего. Кроме того, есть объективные трудности в получении информации – хотя бы та, что ни в одной стране в настоящее время не практикуется обследование на инфицированность репрезентативных случайных выборок из основной популяции населения. Возможно поэтому, по заключению Chin, ни одна из предложенных математических моделей эпидемии СПИД не работает даже в малой степени. Поэтому оценки и прогнозы статистиков носят эмпирический аппроксимирующий характер.
1991 год – год начала второй декады пандемии СПИД. Считают, что пандемия СПИД – это первая в истории действительно всемирная эпидемия, ибо ни одна из известных ранее эпидемий инфекционных заболеваний, обобщенно называемых на русскоязычном литературном жаргоне «чумой и холерой», не носила такого всепланетного характера. Чума уносила сотни тысяч жизней в отдельных регионах планеты, но не доходила до других. И кроме того, кто-то из переболевших выживал. СПИД на сегодня вынуждает признать себя заболеванием со 100% летальностью. Вопрос во времени. По заключению того же J.Chin итоги первой декады эпидемии позволяют придти к выводу, что средний инкубационный период между моментом проникновения вируса в организм и развитием клинических симптомов СПИД – десять лет. Среднее время между постановкой диагноза СПИД и смертью в развитых странах, где больным проводят лечение анти-ретровирусными препаратами -1-2 года, в слаборазвитых странах, где СПИД остается без какого бы то ни было лекарственного лечения – 6-12 месяцев.
Весьма новым заключением специалистов ВОЗ стало то, что от настоящего времени и на будущее главным путем распространения эпидемии стали гетеросексуальные связи: им обязаны 80% новых случаев заражения за первую половину 1991г. Это значит, что состоявшимся фактом является то, что вирус СПИД перестал быть вирусом проституток, наркоманов, гомосексуалистов. Отныне его главной добычей стала та часть человечества, для которой гетеросексуальные контакты являются нормальным и необходимым явлением жизни. Но это как раз те самые люди, которые осуществляют все современное материально-культурное развитие, которые рождают детей – будущее человеческое население планеты. По-видимому не напрасно в течение тысячелетий человеческой истории такие формы общественного сознания, как религиозные учения, по крайней мере основные, проповедовали ограничения сексуального поведения. Вероятно и раньше для выживания человечества моногамия была выгоднее, чем множественные сексуальные связи.
J. Mann считает, что раз эпидемия СПИД глобальная, то в ответ она требует глобальную стратегию противодействия со стороны общества, если оно хотело бы выжить. По его мнению для контроля над пандемией следует обратить, в первую очередь, внимание на три момента: первый – открытое обсуждение вопросов сексуальной практики; второй – так же открытое обсуждение вопросов медицинской практики; третий – лучшее применение достижений науки по мере их появления [Mann J., 1991]. От себя добавим, что, по нашему мнению, важной, если не самой главной в глобальной стратегии противодействия ВИЧ и СПИД может стать просветительская идея разумного самоограничения как в обществе в целом, так и на уровне каждого единичного человека. Она в принципе не может быть применена только к СПИД и ни к чему больше. Как раз напротив, она может иметь только «космический» смысл, отрицая в общем потребительское отношение человека и к конечным запасам нефти, и к конечным запасам всех ресурсов биосферы, в том числе и самого себя.
В настоящее время целеполагание почти любой деятельности начинается с мотива «больше, выше, быстрее, сильнее и т.п.». Задача разумных взрослых – найти и научить детей совсем другим словам, называющим то, зачем живет человек и то, как он живет.